مواد اولیه کشت
مواد اولیه کشت » مواد اولیه کشت
تهيه نمونه VTM و جابجايي آن / فروش محیط VTM
تهيه نمونه و جابجايي آن:
موازين دستورالعمل كنترل عفونت را هنگام تهيه نمونه بايد بدرستي رعايت نمود. بر اساس اطلاعات موجود بيشترين تيتر ويروس در نمونه هاي ترشحات تنفسي تحتاني (خلط، آسپيره ترشحات ناي، شستشوي ترشحات برونش) بدست مي آيد. ترشحات فوقاني دستگاه تنفس نيز توصيه مي شوند علي الخصوص هنگامي كه امكان تهيه نمونه از ترشحات تحتاني وجود نداشته باشد. در صورت شك به اين بيماري بايد دو نمونه سرم نيز از بيمار تهيه شود و تا زماني كه امكان انجام آزمايشات سرولوژيك فراهم شود نگه داري گردد (اين دو نمونه بايد به فاصله حداقل 3 هفته از همديگر تهيه شده باشند و نمونه اول در هفته اول بيماري تهيه مي گردد).
نمونه هايي كه براي بررسي از نظر وجود كوروناويروس به آزمايشگاه ديگري ارسال مي شوند بايد در ابتدا از نظر وجود ساير ميكروارگانيسم ها بررسي شود.
در جدول 1 نام نمونه هايي كه مي توان از بيمار مشكوك تهيه نمود و اقدامات مورد نياز براي ذخيره سازي و انتقال آنها ذكر شده است.
نمونه ها بايد در اسرع وقت به آزمايشگاه رسانده شود (ترجيحا در عرض 42 ساعت). وقتي احتمال مي رود در ساندن نمونه ترشحات تنفسي يا سرم بيمار به آزمايشگاه تاخير ايجاد شود، توصيه مي شود نمونه ها را بر روي يخ خشك بصورت فريز نگهداري نمود.
توضيحات
گروه بندي از نظر خطر انتقال نمونه عفوني
انتقال به آزمايشگاه
محيط انتقال نوع نمونه
مطمئن شويد كه نمونه از ترشحات تحتاني تنفسي تهيه شده است
مواد بيولوژيك، گروه B در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال). اگر بيش از 22 ساعت تاخير در ارسال وجود دارد بر روی يخ خشك فريز گردد نياز نيست خلط (خلطي كه بطور طبيعي ايجاد شده و تهيه گردد)؛ جمع آوری خلط القا شده مي تواند باعث آلوده شدن كادر درماني مسئول گردد.
هرچند ممكن است نمونه تا حدی رقيق شده باشد اما كماكان بهترين نمونه است
مواد بيولوژيك، گروه B در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال). اگر بيش از 22 ساعت تاخير در ارسال وجود دارد بر روی يخ خشك فريز گردد نياز نيست ترشحات برونشها و كيسه های هوايي Bronchoalveolar ( )la va ge
مواد بيولوژيك، گروه B در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال). اگر بيش از 22 ساعت تاخير در ارسال وجود دارد بر روی يخ خشك فريز گردد نياز نيست
ترشحات نای Tracheal aspirate
مواد بيولوژيك، گروه B در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال).
نياز نيست ترشحات حلق و بيني Nasopharyngeal ( )aspirate

اگر بيش از 22 ساعت تاخير در ارسال وجود دارد بر روی يخ خشك فريز گردد
از اين نوع نمونه گيری ويروس را جدا نموده اند
مواد بيولوژيك، گروه B
در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری و منتقل شود (سرمای يخچال).
محيط انتقال ويروس نياز است سواب تركيبي گلو و بيني Combined
nose/throat
مواد بيولوژيك، گروه B در درجه حرارت 2 الي 8 محيط انتقال ويروس نياز است
سواب حلق و بيني درجه سانتي گراد نگهداری و منتقل شود (سرمای يخچال).
Nasopharyngeal ( )swab
مواد بيولوژيك، گروه B
در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال). اگر بيش از 22 ساعت تاخير در ارسال وجود دارد بر روی يخ خشك فريز گردد
محيط انتقال ويروس با محيط سالين نياز است
بيوپسي يا اتوپسي بافتي شامل بافت ريه
مواد بيولوژيك، گروه B
نياز به يخ يا فريز نمودن نيست. نياز نيست
نمونه سرم برای سرولوژی يا تعيين ويروس (در صورت امكان هميشه دو نمونه سرم تهيه شود؛ يكي در فاز حاد در هفته اول و يكي در فاز نقاهت كه ترجيحاً 3 تا 2 هفته بعد مي باشد)
برای تعيين ويروس مخصوصاً در هفته اوّل بكار مي رود
مواد بيولوژيك، گروه B
در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد نگهداری شود (سرمای يخچال).
ضد انعقاد EDTA خون كامل
جابجا نمودن نمونه های ويروسي در محدوده مرزهای هر كشور مطابق با قوانين آن كشور خواهد بود. حمل و نقل نمونه های ويروس دارای كوروناويروس شامل قوانين بين المللي حمل و نقل مواد عفونتزا (2122-2122) است.
روش تاييد معمول كوروناويروس جديد (MERS-CoV) بر اساس تعيين آرايه ژنتيكي منحصربفرد ويروس توسط -real-time RT PCR است. در برخي موارد اگر آزمايشگاه مناسب دارای تجربه كافي و امكانات لازم جهت حفظ نمونه در برابر آلودگي محيط وجود داشته باشد مي توان ويروس MERS-CoV را در محيط كشت سلولي كشت داد. دستورالعمل حاضر درمورد روشهای جداسازی ويروس نمي
باشد.
هرگونه تست برای تعين حضور اين ويروس در نمونه های تهيه شده بايد در آزمايشگاه مجهزی صورت گيرد كه نيروی انساني آموزش ديده در رابطه با تكنيك های مورد استفاده و ايمني زيستي داشته باشد.
تعدادی روش برای تعين آرايه ژنتيكي كوروناويروس جديد كشف و منتشر شده است. تست هايي كه در حال حاضر استفاده مي شوند ژن های ORF 2B ، upE و ORF 2a را مورد شناسايي قرار مي دهند. تعين آرايه ژنتيكي مربوط به هدف upE بسيار حساس است و تعين ORF 2a نيز به همان ميزان حساس است. حساسيت تعيين ORF 2b نسبت به هدف ORF 2a حساسيت كمتری دارد اما از ويژگي
بالاتری برخوردار مي باشد.
بعلاوه، محل های هدف متعددی بر روی ژنوم كوروناويروس MERS-CoV برای شناسايي و تاييد تشخيص معرفي شده اند كه در ژن های RNA-dependent RNA polymerase( RdRp) و nucleocapsid protein( NSeq) وجود دارند. اطلاعات بيشتر در مورد اين روشها در سايت انستيتو ويروس شناسي Bonn آلمان وجود دارد.
الگوريتم ذيل تست های مورد استفاده جهت بررسي بيماران را نشان مي دهد.
روش جایگزین
ارزیابی NSeq و RdRp
آرایه ای دیگر را نشان دهد
منفی
وقتي با دو روش كه آرايه اختصاصي را بر روی ژنوم كوروناويروس جديد (MERS-CoV) بررسي مي نمايند دو نتيجه ناهماهنگ بدست بيايد، مي توان از ارزيابي آرايه ژنتيكي در قطعات ديگری از RNA ويروس، توسط روش PCR مناسب جهت تاييد نتايج آزمايشات قبلي استفاده نمود.
هرچند روش هايي برای ارزيابي سرولوژيك بيان شده اند اما هنوز استفاده گسترده نيافته اند و هرگاه بتوان در سطح وسيع از آنها استفاده نمود، در دستورالعمل های آينده توصيه های لازم در مورد بهره گيری از روشهای سرولوژيك در تشخيص كوروناويروس MERS-CoV منتشر خواهد شد. روشي كه فعلا استفاده مي شود ارزيابي ايمونوفلورسنس (IFA) به روش معمول (22 ساعته) و يا سريع (3 ساعته) است. از روشهای سرولوژيك بعنوان روشهای تاييدی در افراد دارای ارتباط اپيدميولوژيك با بيمار (افراد خانوار يا همكاران تماس يافته با بيمار) استفاده مي شود. در تجربه بيماری سارس نشان داده شد كه شواهد سرولوژيك بعد از 21 روز پس از شروع بيماری بروز پيدا مي كنند و تاييد وجود RNA ويروس در ترشحات تنفسي بيماران با تست RT-PCR پس از 21 روز تقريبا ناممكن مي گردد. از آنجا كه احتمال
واكنش متقاطع وجود دارد استفاده از وسترن بلات نياز به تعداد بيماران بيشتری دارد تا بتوان تست مناسب را معرفي نمود. لازم به ذكر است در بيماران علامتدار تنها به صرف وجود مجموعه ای از چند جواب منفي نمي توان تشخيص را رد نمود. دلايلي كه مي
تواند باعث وجود جواب منفي كاذب گردد عبارتند از: - كيفيت پائين نمونه تهيه شده، مانند آلوده شدن نمونه ترشحات تنفسي با مواد موجود در حفره دهاني-حلقي
تست RT-PCR اختصاصی upE
منفی مثبت
تست RT-PCR اختصاصی ORF 1a
منفی مثبت بیمار تایید شده
تایید کننده کوروناویروس جدید باشد

- نمونه در مراحل خيلي زود يا خيلي دير در سير بيماری تهيه شده باشد - حمل و نقل و نگهداری نمونه بدرستي انجام نشده باشد - دلايل تكنيكي منجر به منفي شدن نمونه هرگاه نمای كلينيكي بيماری و جوانب اپيدميولوژيك بيماری مطرح كننده عفونت با كوروناويروس جديد (MERS-CoV) باشد اما نتايج PCR منفي گزارش شود مي توان از روشهای سرولوژيك برای تاييد تشخيص استفاده نمود و اهميت تهيه "دو نمونه" جهت بررسي سرولوژيك در اينجا نمايان مي گردد.
تفسير نتايج آزمايشات: برای اينكه بتوان بيماری را مورد تاييد شده ناميد بايد يكي از شرايط ذيل محقق شده باشد:
آزمايش PCR برای حداقل دو آرايه اختصاصي ژنتيكي متفاوت مثبت شده باشد؛ يا آزمايش PCR برای يك آرايه اختصاصي ويروس MERS-CoV مثبت شده باشد و يك آرايه متفاوت ديگر كه نشانگر كوروناويروس جديد باشد نيز مثبت گردد.
مثبت شدن تنها يك آرايه اختصاصي برای كوروناويروس MERS-CoV ، تاييد كننده تشخيص نهايي نيست بلكه برای تعريف "مورد
محتمل"يكمعيارمحسوب ميشود.سايرمعيارهایكلينيكيواپيدميولوژيكدرمبحث"تعاريفمواردبيماری"آوردهشدهاست. قبل از تهيه و ارسال نمونه بايد مطمئن بود كه بر اساس تعاريف ارائه شده بيمار مورد نظر مورد "مشكوک كوروناويروس MERS" مي
باشد.
نمونه هاي مورد نظر و اولويت هاي نمونه گيري:
برای افزايش احتمال تشخيص عفونت توصيه مي شود نمونه های متعدد از محل های مختلف عفوني شده تهيه گردد. برای مثال يك نمونه از دستگاه تنفسي فوقاني توسط سواب بيني حلقي (Nasopharyngeal) و يك نمونه از ترشحات دستگاه تنفس تحتاني (به عنوان مثال نمونه خلط) تهيه شود. تا جائيكه امكان دارد نمونه ها در زمان های مختلف تهيه شوند.
نمونه ترشحات تنفسي تحتاني و مدفوع براي جمع آوري از بيمار ارجح هستند.
برای انتقال در مدت زمان كوتاه بايد نمونه تهيه شده را در درجه حرارت 2 الي 8 درجه سانتي گراد (يخچال) نگهداری و به سريعترين زمان (در عرض 22 الي22 ساعت؛ ترجيحاً 22 ساعت)منتقل نمود. اگر در ارسال نمونه ممكن است تاخيری ايجاد گردد پس از تهيه نمونه، آنرا در اولين فرصت در سرمای منفي 21 درجه سانتي گراد منجمد نمائيد (با توجه به موارد استثناء که در ادامه بیان خواهند شد).
بر روی هر نمونه تهيه شده از بيمار بايد تاريخ تهيه نمونه، نوع نمونه تهيه شده و كد مشخصه بيمار ذكر شوند.
1. جمع آوري نمونه از دستگاه تنفسي بيمار I. دستگاه تنفسي تحتاني:
Bronchoalveolar ( مايع پلور، آسپيره ترشحات ناي، شستشوي آلوئول و كيسه هاي هوايي )lavage
در يك ظرف غيرقابل نشت، استريل، دارای درب پيچ شونده مخصوص جمع آوری خلط، 2 الي 3 سي سي از اين مايعات را بريزيد. نمونه را تا زمان ارسال (ماكزيمم 22 ساعت) در درجه حرارت پائين يخچال (2 الي 8 درجه سانتي گراد) نگهداری نمائيد. اگر بيش از 22 ساعت برای ارسال نمونه زمان لازم است نمونه را در سرمای منفي 21 درجه سانتي گراد منجمد (فريز) نمائيد و در شرايط منجمد آنرا منتقل نمائيد.
خلط
از بيمار بخواهيد تا مقداری آب را در دهان غرغره نمايد و سپس با يك سرفه قوی و عميق ترشحات خلط عمقي خود را از گلو مستقيماً به درون ظرف استريل و غيرقابل نشت (دارای درب پيچدار) بريزد. نمونه را تا زمان ارسال (ماكزيمم 22 ساعت) در درجه حرارت پائين يخچال (2 الي 8 درجه سانتي گراد) نگهداری نمائيد. اگر بيش از 22 ساعت برای ارسال نمونه زمان لازم است نمونه را در سرمای منفي 21 درجه
سانتي گراد منجمد (فريز) نمائيد و در شرايط منجمد آنرا منتقل نمائيد.
II. دستگاه تنفس تحتاني :)Nasopharyngeal( و بيني حلقي )Oropharyngeal( سواب دهاني حلقي
تنها از سواب های با الياف مصنوعي و دسته پلاستيكي استفاده شود. از سواب های دارای آلژينات كلسيم و سواب های دارای دسته چوبي استفاده نگردد چرا كه دارای موادی هستند كه ويروس ها غيرفعال نموده و باعث مهار آزمايش PCR مي شوند. سواب ها بلافاصله در لوله استريل دارای 2 الي 3 سي سي ماده انتقال ويروس (VTM- viral transport media) قرار داده شوند. نمونه را تا زمان ارسال (ماكزيمم 22 ساعت) در درجه حرارت پائين يخچال (2 الي 8 درجه سانتي گراد) نگهداری نمائيد. اگر بيش از 22 ساعت برای ارسال نمونه زمان لازم است نمونه را در سرمای منفي 21 درجه سانتي گراد منجمد (فريز)
نمائيد و در شرايط منجمد آنرا منتقل نمائيد.
o سواب بيني حلقي (نازوفارنژيال): سواب را بطور موازی با استخوان كام وارد بيني نموده و چند ثانيه در محل نگاه داريد تا ترشحات را جذب نمايد. از هر دو حفره بيني بايد نمونه تهيه شود.
o سواب دهاني حلقي (اوروفارنژيال): بدون برخورد سواب با زبان و لوزه ها، از ته حلق نمونه تهيه گردد.
ترشحات بيني:
در اين روش 2 الي 3 سي سي از ترشحات بيني، در ظرف استريل و غير قابل نشت دارای درب پيچدار مخصوص نمونه خلط، ريخته مي شود. نمونه در سرمای يخچال نگهداری و منتقل گردد و اگر بيش از 22 ساعت (ترجيحاً 22 ساعت) در ارسال نمونه تاخير وجود دارد بايد نمونه را در سرمای منفي 21 درجه سانتي گراد منجمد نمود.
4. خون: سرم:
برای آزمايش آنتي بادی های سرم لازم مي شود نمونه سرم بيمار تهيه گردد. بهتر است نمونه سرم در مرحله حاد بيماری، ترجيحاً در هفته اول تهيه شود و نمونه بعدی با فاصله حداقل 3 هفته و در مرحله نقاهت تهيه گردد.
كودكان و بالغين- حدود 1 تا 21 سي سي خون كامل را در لوله ريخته و اجازه مي دهند تا لخته شود، سانتريفيوژ مختصر نموده و نمونه سرم را در لوله استريل جمع آوری كننده سرم مي ريزند. حداقل نمونه سرم كه برای آزمايش لازم مي شود 211 ميكروليتر است. نمونه سرم در سرمای يخچال نگهداری و منتقل مي شود. منجمد نمودن و جابجايي نمونه منجمد نيز قابل انجام است. شيرخواران- برای انجام آزمايش در شيرخواران حداقل يك سي سي نمونه خون كامل لازم است تهيه شود.
EDTA پلاسما (خون مقدار 21 سي سي خون را در لوله آغشته به هپارين (درب سبز) يا لوله دارای EDTA (درب قرمز) بريزيد. برای نگهداری و انتقال نمونه از سرمای يخچال استفاده مي شود. دقت نمائيد نمونه نبايد منجمد گردد.
3. مدفوع:
مقدار 2 تا 1 گرم مدفوع (آبكي يا غيرآبكي) را ظرف استريل مخصوص جمع آوری خلط كه درب پيچدار داشته و غيرقابل نشت باشد جمع آوری نماييد. نمونه را تا زمان ارسال (ماكزيمم 22 ساعت) در درجه حرارت پائين يخچال (2 الي 8 درجه سانتي گراد) نگهداری نمائيد. اگر بيش از 22 ساعت برای ارسال نمونه زمان لازم است نمونه را در سرمای منفي 21 درجه سانتي گراد منجمد (فريز) نمائيد و در شرايط منجمد آنرا منتقل نمائيد.
2. حمل و نقل نمونه: نمونه های بيماران مشكوک به عفونت كوروناويروس جديد بايد بر اساس دستورالعمل های انجمن حمل و نقل هوايي بين
المللي (IATA) بسته بندی و حمل و نقل گردند. اگر در ارسال نمونه ها تاخير وجود دارد و بايد نمونه را به مدت زياد برای مسافت های طولاني حمل و نقل نمود، مي توان بطور تركيبي از يخ خشك (جهت انجماد) و ice-pack ژلي استفاده نمود زيرا ice-pack های ژلي درصورت تمام شدن يخ خشك مي توانند به مدت 22 تا 28 ساعت نمونه را در سرمای حرارت 2 تا 8 درجه سانتي گراد حفط نمايند.
دستورالعمل نحوه صحيح نمونه گيری از خلط:

محیط VTM محیط انتقال و نگهداری نمونه ویروسی در بسته های ۵۰۰ سی سی محصول شرکت BD آمریکا وارد شده از کشور ترکیه ...
محیط VTM محصول کمپانی BD در بسته های ۵۰۰ سی سی
محیط VTM محصول کمپانی BD در بسته های ۵۰۰ سی سی
مواد اولیه کشت
محیط کشت هند
code:715910 Chloroform for HPLC & Spectroscopy 2.5 lit
code:715910 Chloroform for HPLC & Spectroscopy 2.5 lit
code:715910 Chloroform for HPLC & Spectroscopy 2.5 lit
محیط کشت هند
محیط کشت هند
code:762735 1-Pentane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
code:762735 1-Pentane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
code:762735 1-Pentane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
محیط کشت هند
code:75912 1-Octane Sulphonic Acid Sodium Salt (Anhydrous) HPLC for Ion-Pair Chromatography
code:75912 1-Octane Sulphonic Acid Sodium Salt (Anhydrous) HPLC for Ion-Pair Chromatography
code:75912 1-Octane Sulphonic Acid Sodium Salt (Anhydrous) HPLC for Ion-Pair Chromatography
محیط کشت هند
code:743700 1-Hexane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
code:743700 1-Hexane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
code:743700 1-Hexane Sulphonic Acid Sodium Salt Anhydrous For HPLC
محیط کشت هند
Hydrofluoric Acid AR/ACS 40.0-42.0% 5LIT code:544735
Hydrofluoric Acid AR/ACS 40.0-42.0% 5LIT code:544735
Hydrofluoric Acid AR/ACS 40.0-42.0% 5LIT code:544735
محیط کشت هند
محیط کشت هند