Search

پنجشنبه 9 فروردين 1403

منو

Sigma



لينك سايت اين كالا



قيمت:   ۰ تومان

مواد اولیه آزمایشگاهی » Sigma

پروتئیناز کا Proteinase K from Tritirachium album واحد 1 گرمی کد p2308 / بدلیل نوسان قیمت ارز قیمت درج نمیگردد.

1- پروتئیناز K را چگونه غیر فعال کنیم؟

این سوال یکی از رایج ترین سوالات است، و پاسخ بسیار ساده ای دارد. گرما دادن از پر کاربرد ترین موارد در غیر فعال کردن پروتئیناز K است. فعالیت پروتئیناز K با دما افزایش پیدا می کند و در 65 درجه سانتیگراد به بالاترین میزان خودش می رسد . اما شما می توانید دما را تا 95 درجه سانتیگراد به مدت 10 دقیقه بالا ببرید تا آنزیم را غیرفعال کنید.

البته به یاد داشته باشید حتی بعد از این دما هم به میزان خیلی پایینی آنزیم فعالیت می کند. لذا مهارکننده های پروتئاز از قبیل PMSF و AEBSF می توانند برای همیشه آنزیم را غیرفعال کنند.

نکته اینکه در مورد دمای واقعی غیر فعال سازی پروتئیناز K  اتفاق نظر وجود ندارد ولی باید چیزی بین 70 الی 95 درجه باشد.

2- دمای بهینه فعال کردن پروتئیناز K چه دمایی است؟

همانطور که در مورد 1 توضیح داده شد، فعالیت پروتئیناز K با افزایش دما افزایش پیدا می کند (البته تا درجه خاصی). دمای بهینه برای فعالیت آنزیم بین 50 الی 60 درجه سانتیگراد است. دمای بلا به باز شدن پیچش های پروتئین های دیگر کمک میکند و بنابراین پروتئیناز K می تواند به راحتی پروتئینها را بشکند.

البته بهینه کردن دما مهمترین چیز در این فرآیند نیست. گاهی اوقات روشهای مخصوصی باید انجام شود تا نتیجه بالاترین بازده را داشته باشد. چیزی که باید به خاطر سپرد این است که هنگامی که دماهای مختلف به آنزیم داده می شود، پروتئیناز K همچنان در گستره دمایی بین 20 تا 65 درجه فعال است و این گستره وسیع می تواند برای بسیاری از روشهای مولکولی مهم باشد. در درمای بالای 65 درجه با افزایش دما ریسک غیر فعال شده آنزیم هم وجود داره.

3- چه ارتباطی بین کلسیم و پروتئیناز K است؟

اتصال پروتئیناز K به Ca2+ باعث پایداری آنزیم می شود. مخصوصا زمانی که آنزیم در معرض حرارت قرار می گیرد. کلسیم همچنین پروتئیناز K را در برابر اتولیز محافظت می کند. کلسیم به مقاومت دمایی پروتئیناز K کمک می کند ولی در فعالیت پروتئولیتیک نقشی ندارد.

بر طبق یافته های Richard Tullis and Harvey Rubin  این ارتباط زمانی جالب می شود که آنزیم DNase I هم دخیل باشد. پروتئیناز K به منظور غیر فعال کردن DNase و RNase استفاده می گردد ولی DNase I در حضور Ca2+ می تواند از پروتئیناز K محافظت گردد (در غلظت 1mg/ml). اما RNase در هر صورت غیرفعال می گردد. یافته های آنها روشی را برای DNaseI بدون RNase و یا استخراج RNA پلیمریزه شده ارائه نمود.

4- آیا EDTA پروتئیناز K را غیر فعال می کند؟

این سوال در زمانی که با پروتئیناز K کار می شود ایجاد می شود. شلاته کننده های مانند EDTA یا EGTA تاثیر مستقیمی بر روی فعالیت پروتئیناز K ندارند.

اغلب، استفاده از EDTA به همراه پروتئیناز K در هنگام خالص سازی DNA یا RNA برای حذف کلسیم از محیط است. اما از آنجایی که کلسیم برای پایداری پروتئیناز K اهمیت دارد، بنابراین حذف کلسیم از پایداری پروتئیناز K کم می کند.

5- فعال کننده های پروتئیناز K چه چیزهایی هستند؟

فعال کننده های پروتئیناز K شامل SDS یا (Sodium dodecyl sulfate) و اوره می شود. معمولا، پروتئیناز K در بافرهایی که دارای این مواد هستند بسیار پایدارتر و فعالتر است.

6- چگونه پروتئیناز K در لیز (هضم) سلولی شرکت می کند؟

در پاسخ به این سوال، باید دانست که ماهیت پروتئیناز K چیست. این آنزیم یک پروتئاز وسیع الطیف است که توانایی هضم انواع پروتئین را دارد. هنگامی که در لیز سلولی از این آنزیم استفاده می شود، بخصوص در استخراج و خالص سازی DNA، پروتئیناز K می تواند با هضم پروتئینهای سطحی جزئی از فرآیند باشد.

هنگامی که زمان محلول کردن مجدد و لیز شدن هسته در بافر حاوی پروتئیناز K می رسد ، پروتئیناز K به هضم پروتئین ها کمک می کند که در نهایت منجر به هضم نمونه می گردد.

7- چرا در بسیاری از پروتوکل های استخراج DNA بافر لیز دارای پروتئیناز K و RNase است؟

این سوال هر از چند گاهی مطرح می شود زیرا به نظر می رسد یک موضوع متناقض است. گفته می شود پروتئیناز K، آنزیم RNases را هضم می کند ، بنابراین چرا این دو با هم در یک بافر لیز (Lysis buffer) اضافه می شوند؟

اول از همه ، شما می خواهید RNase اضافه شود که از آلودگی RNA هنگام جداسازی DNA جلوگیری شود و همچنین می خواهید از پروتئیناز K استفاده کنید زیرا پروتئین های DNase و RNase را تجزیه کند.

جواب این سوال واقعاً ریشه در زمان بندی و بهینه سازی دارد. برخی از محققان پیشنهاد می کنند RNase را در ابتدا اضافه کنید و به کار خود فرصت دهید.  سپس پروتئیناز K و SDS می توانند برای تجزیه پروتئین های ناخواسته اضافه شوند. نکته دیگری که باید در نظر داشته باشید این است که برخی پروتوکل ها از شما می خواهند که برای مدت معینی SDS ، پروتئیناز K و RNase را در دمای 37 درجه سانتیگراد اانکوبه کنید. از آنجایی که این دما برای کار پروتئیناز K بهینه نیست احتمالا در این دما به RNase فرصت داده می شود که کار کند. مراحل بعدی زمان انکوباسیون دوم را پیشنهاد می دهد که 55 درجه سانگراد است . زمان بیشتر که بسیار برای پروتئیناز K بهینه شده است ، اجازه می دهد دیگر پروتئین های ناخواسته حذف شوند.

8- چرا دانستن عمل پروتئیناز K مهم است؟

ما در واقع یک مقاله کامل را برای توضیح بیشتر در مورد فعالیت و غلظت پروتئیناز K اختصاص داده ایم.  سناریویی که ارائه دادیم شرایطی است که یک محقق از پروتوکل قدیمی با  1 میکرولیتر پروتئیناز K استفاده می کند.  در حالی که پروتوکل آن از حجم می گوید و ممکن است کابر نیاز به میزان بیشتر یا کمتر از آنزیم داشته باشد.. در پایان ، مقاله به مهمترین اطلاعات در مورد فعالیت آنزیم ، فعالیت خاص و راههای دیگر برای ارزیابی پروتئیناز K اشاره می کند.

9- کاربردهای پروتئیناز K چه مواردی هستند؟

پروتئیناز K ، یک پروتئیناز سرین وسیع الطیف است که تحت کلاس مشابه – سوبتیلیسین قرار دارد (دو نوع پروتئیناز سرین وجود دارد ، مشابه- کیموتریپسین و مشابه – سوبتیلیسین)  به عنوان یک پروتئاز با وسیع الطیف، در درجه اول برای جداسازی اسیدهای نوکلئیک مورد استفاده قرار می گیرد، DNA ژنومی ، RNA سیتوپلاسمی ، DNA بسیار بومی ، RNA و غیره. برای این کاربردها ایده آل است زیرا پروتئیناز K قادر به تجزیه پروتئین ها و غیرفعال کردن Dnasesو  RNases است. که اگر نباشد نمونه مورد نظر که می تواند DNA  یا RNA باشد تخریب می شود. برای ساده تر کردن این موضوع از این آنزیم در موارد ذیل استفاده می شود:

  •  هضم پروتئین های ناخواسته در کاربردهای بیولوژی مولکولی
    • از بین بردن اندوتوکسین های وابسته به پروتئین های کاتیونی مانند لیزوزیم و RNaseA
    • حذف نوکلئازها برای هیبریداسیون درجا (insitu hybridization)
    • تحقیقات پریون مانند TSE (انسفالوپاتی اسفنجی قابل انتقال)
    • رد پای پروتئین
    • جداسازی میتوکندری
    • جداسازی DNA ژنومی
    • جداسازی RNA سیتوپلاسمی
    • جداسازی DNA یا RNA بسیار بومی

ادامه مقاله 20 سوال در مورد پروتئیناز k را می خوانید…

10- نگهداری پروتئیناز K چگونه است؟ دمای نگهداری آن چند درجه است؟

محلول استوک: محلول استوک خودتان را الیکوت کنید و در 20- درجه سانتیگراد برای مدت بیش از یک سال نگهداری کنید.

پودر لیوفیلیزه شده: در 20- درجه سانتیگراد و برای مدت بیش از 2 سال نگهداری کنید.

11- چگونه محلول استوک تهیه کنیم؟

از بافر Tris و CaCl2 استفاده می شود. 

12- با یک گرم پودر پروتئیناز K چه میزان محلول می توان تهیه کرد؟

در محلول 20mg/ml ، محلول معادل است با:

اندازه بسته بندیمعادل به صورت محلول  (20mg/ml)
100mg5ml
500mg25ml
1g50ml

 

این جدول بر اساس فعالیت س30u/mg  و600AU/ml در یک محلول 20mg/ml است.

13- پروتئیناز K در چه چیزی حل می شود/ پروتئیناز K را چگونه حل کنیم؟

پروتئیناز K شدیدامحلول درآب است و همچنین می توان آن را در Tris و PBS حل کرد.

هنگامی که با PBS کار می کنید، کمی باید مراقب باشید، بخاطر pH (که در میزان بهینه باشد) . اضافه کردن پروتئیناز K به میزان کم در هنگام محلول شدن می تواند کمک کننده باشد.

14- چگونه نوکلئاز ها را بوسیله پروتئیناز K غیر فعال کنم؟

پروتئیناز K با فعالیتی که در مقابل پروتئینهای هضم کننده دارد می تواند از نمونه DNA محافظت کند. از این پروتوکل استفاده کنید تا بوسیله پروتئیناز K بتوانید نوکلئازها را در هنگام استخراج DNA غیر فعال کنید.

15- آیا جایگزینی بغیر از پروتئیناز K در هنگام استخراج DNA وجود دارد؟

مزیت استفاده از پروتئیناز K این است که این آنزیم می تواند طیف وسیعی از انواع نوکلئازهای آسیب دهنده را غیرفعال کند. همچنین گزینه بسیار مناسبی برای هضم پروتئین های غشای بیرونی سلول است. به هر حال اگر از مواد دیگری برای این کار می خواهید استفاده کنید استخراج توسط فنول – کلوروفرم می تواند گزینه دیگری باشد تا پروتئین ها از محلول حذف شوند. البته این روش بسیار سمی تر می باشد.

16- پروتئناز K چه کاری می تواند برای بیماری پریون یا TSE انجام دهد؟

پروتئیناز K در تشخیص بین PrP c ( پروتئین پریون / پروتئین مقاوم به پروتئاز) و PrP sc (ایزوفرم عامل بیماری) استفاده می شود. هر دو پروتئین ها دارای وزن مولکولی یکسانی هستند. به هر حال PrP sc به پروتئیناز K مقاوم است. نمونه هایی که دارای هر دو پروتئین هستند بوسیله پروتئیناز K تیمار می شوند و PrP c از بین می رود و PrP sc تبدیل به PrP RES می شود. که دارای وزن مولکولی کمتر بوده و ته نشین می شود و بنابراین تشخیص داده می شود.

17- وزن مولکولی پروتئیناز K چقدر است؟

وزن مولکولی آن 28.5 کیلو دالتون است.

18- pH مناسب پروتئیناز K چند است؟

پروتئیناز K در pH بین 7.5 و 12 فعال است.

19- توالی اولیه پروتئیناز K چیست؟

GAAQTNAPWGLARISSTSPGTSTYYYDESAGQGSCVYVIDTGIEASHPEF

EGRAQMVKTYYYSSRDGNGHGTHCAGTVGSRTYGVAKKTQLFGVKVLDDN

GSGQYSTIIAGMDFVASDKNNRNCPKGVVASLSLGGGYSSSVNSAAARLQ

SSGVMVAVAAGNNNADARNYSPASEPSVCTVGASDRYDRRSSFSNYGSVL

DIFGPGTSILSTWIGGSTRSISGTSMATPHVAGLAAYLMTLGKTTAASAC

RYIADTANKGDLSNIPFGTVNLLAYNNYQA

20- پروتئیناز K چیست؟

پروتئیناز K یک سرین پروتئاز وسیع الطیف بوده که از خانواده سوبتیلیسین است. این آنزیم یک محصول شناخته شده برای تحقیقات است به دلیل توانایی آن برای غیر فعال سازی RNase و DNase هایی که به نمونه های اسید نوکلئیک در طی فرآیند استخراج آسیب می زنند. اسم این آنزیم از تواناییش در هیدرولیز کراتین نشات می گیرد.



Nonafluorobutane-1-sulfonic acid ماده نونا فلورو بوتان-1-سولفونیک اسید کد 562629 شرکت سیگما حجم 5 و 25 گرم با خلوص 97% موجود
Nonafluorobutane-1-sulfonic acid ماده نونا فلورو بوتان-1-سولفونیک اسید کد 562629 شرکت سیگما حجم 5 و 25 گرم با خلوص 97% , نونا فلورو ...
Sigma
۰ تومان


ماده تریس(۲-آمینو اتیل)آمین محصول آمریکا شرکت سیگما واحد ۱۰ سی سی کد ۲۲۵۶۳۰ تریس ۲ امینو اتیل امین کس نامبر ...
ماده تریس(۲-آمینو اتیل)آمین محصول آمریکا شرکت سیگما واحد ۱۰ سی سی کد ۲۲۵۶۳۰ تریس ۲ امینو اتیل امین کس نامبر ...
Sigma
۰ تومان


تری متیلول پروپان تری متاکریلات TMPTMA محصول شرکت سیگما امریکا در حجم ۱۰۰ و ۵۰۰ گرمی / Trimethylolpropane trimethacrylate کد محصول ...
تری متیلول پروپان تری متاکریلات محصول شرکت سیگما امریکا در حجم ۱۰۰ و ۵۰۰ گرمی / Trimethylolpropane trimethacrylate کد محصول ...
Sigma
۲,۲۰۰,۰۰۰ تومان


فروش پلی کاپرولاکتون ، PCL , پلی کاپرو لاکتون PCL ، Polycaprolactone با جرم مولکولی ۸۰/۰۰۰ محصول شرکت سیگما امریکا کد ...
فروش پلی کاپرولاکتون ، پلی کاپرو لاکتون PCL ، Polycaprolactone با جرم مولکولی ۸۰/۰۰۰ محصول شرکت سیگما امریکا کد ۴۴۰۷۴۴ ...
Sigma
۰ تومان


فروش پلی کاپرولاکتون ، پلی کاپرو لاکتون PCL ، Polycaprolactone با جرم مولکولی ۸۰/۰۰۰ محصول شرکت سیگما امریکا کد ۴۴۰۷۴۴ ...
فروش پلی کاپرولاکتون ، پلی کاپرو لاکتون PCL ، فروش پلی کاپرولاکتون ، پلی کاپرو لاکتون PCL ، Polycaprolactone با جرم مولکولی ...
Sigma
۰ تومان


ژل ریت ( ژل رایت،ژل زان ) Gelzan™ CM Gelrite® Synonym: Agar substitute gelling agent, Gellan Gum محصول سیگما کد G1910 در حجم 250 گرمی و یک کیلویی ...
ژل ریت ( ژل رایت،ژل زان، ) Gelzan™ CM Gelrite® Synonym: Agar substitute gelling agent, Gellan Gum محصول سیگما کد G1910 در حجم 250 گرمی و یک گیکلویی ...
Sigma
۰ تومان


تروپیک اسید 25 گرمی Tropic acid محصول سیگما کد T89206
تروپیک اسید 25 گرمی Tropic acid محصول سیگما کد T89206 جهت استعلام قیمت نام محصول را به شماره 09122967819 از طریق واتس اپ ...
Sigma
۰ تومان


فلوریسیل کروماتوگرافی مش 60تا100 - محصول سیگما کد 46385 - موجود - Florisil® Adsorbent for Chromatography 60-100 mesh Synonym: Activated magnesium silicate, ...
فلوریسیل کروماتوگرافی مش 60تا100 - محصول سیگما کد 46385 - Florisil® Adsorbent for Chromatography 60-100 mesh Synonym: Activated magnesium silicate, Florisil®, ...
Sigma
۰ تومان


سدیم تترا بورات(بوراکس)دکاهیدرات12 آبه کد 9876 واحد1کیلوگرم Sodium tetraborate decahydrate
سدیم تترا بورات(بوراکس)دکاهیدرات12 آبه کد 9876 واحد1کیلوگرم Sodium tetraborate decahydrate
Sigma
۰ تومان
1
بعدي
آخر
(1 تا 10 از 31)

راه اندازي فروشگاه در Eforosh رايگان است

فروش تریس هیدروکلراید،کوجیک اسید,استونیتریل،گلیکولیک، گلوکزامین،کندروتین،دی،فنیل،استو،نیتریل،متادن،افغانستان،کوژیک اسید,هیالورونیک اسید,دی فنیل استونیتریل,DIPHENYLACETONITRILE,پاراستامول,PARACETAMOL,استامینوفن,سدیم اسکوربیل فسفات،متادون،متادن،فروش متادون،متادون پودری،متادون پودری چین،Methadon,فروش Methadon,واردکننده متادون،خرید متادون،تریزما هیدروکلراید،تریس هیدروکسی متیل امینو متان،فروش تریس بیس،فروش تریس هیدروکلراید،تریتون ایکس،فروش تریتون،فروش پنتیلن گلایکول،خرید پنتیلن گلایکول،پنتیلن گلایکول پنتیلن گلیکول پنتیلن ،پنتیلن گلایکول، پنتیلن گلیکول، penthylene glycol , ارایشی ، بهداشتی، ارایشی بهداشتی، بهداشتی، آرایشی، واردات، چین،فروش ترایزول ترمو،فروش ترایزول گیبکو،خرید و فروش سدیم اسکوربات،وارد کننده سدیم اسکوربات،وارد کننده سدیم آسکوربات،واردکننده سدیم اسکوربات،واردکننده سدیم آسکوربات،فروش ویتامین سی،فروش ویتامین c، کلاژن،فروش کلاژن،فروش کلاژن خوراکی،ژلاتین،کلاژن گاوی،کلاژن ماهی،فروش کلاژن خوراکی،انواع کلاژن خوراکی،انواع کلاژن،واردات کلاژن،واردات کلاژن خوراکی،collagen،فروش collagen خوراکی،واردکننده کلاژن،کلاژن فرانسه،کلاژن گاوی خوراکی چینی،کلاژن چینی،اتیل وانیلین،فروش اتیل وانیلین،وارد کننده،مواد شیمیایی،مواد ازمایشگاهی،مواد آزمایشگاهی،فروش اسید آمینه،فروش اسید امینه، فروش ال پرولین، فروش پرولین، گلوتامین،تری فلورواستیک اسید،سدیم اسکوربات،سدیم آسکوربات،واردات چین،فروش مواد شیمیایی،فروش مواد شیمیائی،هیالورونیک اسید،واردات سیگما،فروش رنگ،سیگما،مرک،آلمان،المان،چین،واردکننده مواد شیمیایی شرکت مرک آلمان،واردات مواد شیمیایی،واردات مواد شیمیائی،نماینده رسمی شرکت مرک در ایران،واردات دارو،دارو،مواد اولیه،ارایشی بهداشتی،مواد اولیه آرایشی بهداشتی،سیگما،کد،واحد،وارد،دانشگاه،ازمایشگاه،آزمایشگاه،واردکننده سیگما،فروش مواد آزمایشگاهی،MERCK,SIGMA,ALDRICH,CDH,CDH INDIA,DEXTRIN,DEXTRINE,HYALURONIC ACID,هیالورونیک اسید،نماینده شرکت سیگما،مواد،فروشنده،واردکننده،فروش مواد شیمیایی،فروش مواد شیمیائی،اسید آمینه،اسیدهای آمینه،اسید امینه،دارو،مواد اولیه،شیمی،نمایندگی مرک،نمایندگی MERCK،شیمی،ازمایش،ازمایشگاه،آزمایشگاه،آزمایشگاهی،واردات،اصل،ارجینال،ارژینال،واردکننده شرکت CDH، صادرات،واردات،هند،سولفوریک،متانول،اتانول،هیدروژن،سولفات،سدیم،پتاسیم،کلریدریک،ارایشی،بهداشتی،دارو،واردات مواد اولیه دارویی،واردات مواد شیمیایی شرکت مرک المان،کارلو،کارلو اربا،نماینده شرکت کارلو ایتالیا،اسید،اسید امینه،اسید آمینه،اسیدهای امینه،واردات انواع ویتامین،ویتامین ا،ویتامین آ،ویتامین بی،ویتامین سی،ویتامین دی،ویتامین ای،ویتامین د،ویتامین کا،لایزین،گلوتامین،استیک اسید،فلورو،فلوئور،آهن،اهن،سولفات،هیدروژن،هیدرات،واردات مواد شیمیایی،واردات مواد شیمیائی،واردات شرکت مرک،واردات شرکت ،شیمی،فیزیک،شیشه الات،شیشه آلات،،واردات مواد شیمیایی شرکت سیگما،مواد اولیه،داروسازی،سازمان،استونیتریل،هند،مواد هندی،مواد،ماده،مواد،نمایندگی مرک المان،نمایندگی مرک آلمان،نماینده سیگما امریکا،نماینده سیگما آمریکا،نمایندگی سیگما،فروشنده مواد شیمیایی،مواد عمده،مواد خرد،داروسازی تماد،داروپخش،انستیتو پاستور،واکسن،امپول،آمپول،واردات مواد،مواد کارلو،هگزان،اتیل،متیل،کلراید،دی فنیل استونیتریل،ان-۲-کلرو پروپیل دی متیل امونیوم کلراید،استیک اسید،ضدعفونی،ماسک،الکل،کلسیم،فسفات،بروماید،فلوراید،بتاسیکلودکسترین،بتا سیکلو دکسترین،بتا-سیکلودکسترین،شیمی،استامینوفن،پاراستامول،اتیل اولئات،اسدهای چرب،مریستات،گلیسیدیل،فروش استامینوفن،فروش ،واردات مرک،سدیم دودسیل سولفات،فروش بنزوکائین،بنزوکائین,لیدوکایین,لیدوکائین,دی فنیل استونیتریل,مواد شیمیایی,شیمیایی,شیمیائی,تائورین,کراتین,لوتئین,هیدروکینون,پروتئین,دگزامتازون,سیپروهپتادین,سدیم اسکوربیل فسفات,سدیم,پتاسیم